Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) ist eine molekulare Methode der genetischen Analyse, mit der Individuen anhand eindeutiger Muster von identifiziert werden können Restriktionsenzym Schneiden in bestimmten Regionen der DNA.
Die Technik wird auch als RFLP-Analyse bezeichnet und nutzt die Vorteile der Polymorphismen in den genetischen Codes einzelner Menschen. Obwohl alle Mitglieder einer Art im Wesentlichen das gleiche Erbgut haben, erklären diese geringfügigen Unterschiede Unterschiede im Phänotyp, wie z. B. Aussehen oder Stoffwechsel, zwischen Individuen.
RFLP-Analysetechnik
Die RFLP-Analysetechnik umfasst das Schneiden einer bestimmten Region von DNA mit bekannter Variabilität, mit Restriktionsenzymen, dann Trennen der DNA-Fragmente durch Agarosegelelektrophorese und Bestimmen der Anzahl der Fragmente und der relativen Größen.
Ein Restriktionsenzym ist ein Enzym, ein Proteinmolekül, das DNA an Restriktionsstellen schneidet. Im Wesentlichen wird die DNA-Probe durch die Restriktionsenzyme aufgebrochen und verdaut. Die resultierenden Fragmente werden nach ihrer Länge getrennt, und das Muster der Fragmentgrößen unterscheidet sich für jedes getestete Individuum.
Der vollständige RFLP-Prozess erfordert Sondenmarkierung, DNA-Fragmentierung, Elektrophorese, Blotting, Hybridisierung, Waschen und Autoradiographie. Das detektierte RFLP wird unter Verwendung eines Röntgenfilms in der Autoradiographie sichtbar gemacht, wobei DNA-Fragmente betrachtet und analysiert werden können, nachdem sie durch Elektrophorese voneinander getrennt wurden.
Antrag auf RFLP-Nutzung
Einige der Anwendungen für die RFLP-Analyse umfassen:
- DNA-Fingerabdruck-Methode: Forensiker können mithilfe der RFLP-Analyse Verdächtige anhand von Beweisproben identifizieren, die an Tatorten gesammelt wurden.
- Vaterschaft: RFLP wird auch zur Bestimmung der Vaterschaft oder zur Rückverfolgung von Vorfahren verwendet.
- Genetische Vielfalt: Die Technik kann zur Untersuchung der Evolution und Migration von Wildtieren, zur Untersuchung von Brutmustern in Tierpopulationen sowie zur Erkennung und Diagnose bestimmter Krankheiten verwendet werden.
Die Technik des RFLP-Nachweises von Variationen in Genomen ist ein wichtiges Werkzeug bei der Genomkartierung und der Analyse genetischer Krankheiten. Wenn der Ort eines bestimmten Krankheitsgens in einem bestimmten Chromosom gesucht wird, würden Forscher dies tun Analysieren Sie die DNA von Familienmitgliedern mit der Krankheit und suchen Sie dann nach ähnlichen Vererbungsmustern bei RFLP Allele.
Sobald ein Krankheitsgen lokalisiert ist, könnte die Durchführung einer RFLP-Analyse an anderen Familienmitgliedern einen Träger der mutierten Gene aufdecken oder das allgemeine Krankheitsrisiko signalisieren. Es ist wichtig anzumerken, dass die RFLP-Technik nicht weit verbreitet ist, da neuere, robustere Techniken für die DNA-Analyse in der Forensik und in mehreren anderen Bereichen verwendet werden.
Negative Aspekte von RFLP
Leider ist die RFLP-Analysetechnik langwierig und langsam. Abgesehen davon, dass eine große Menge an Proben-DNA benötigt wird, müsste die Probe normalerweise etwa die Größe eines Viertels haben, d. H. relativ groß für DNA-Proben - der Prozess, von der Sondenmarkierung über das Waschen bis hin zur Autoradiographie, kann bis zu einem vollen Monat dauern Komplett.
Die Ergebnisse des Humangenomprojekts haben die Notwendigkeit von RFLP weitgehend ersetzt. Das Projekt ermöglichte die Bestimmung der gesamten Sequenz der in menschlichen Zellen gefundenen DNA, des menschlichen Genoms, und die Identifizierung aller Gene im menschlichen Genom.