FSME und TAE werden als Puffer in der Molekularbiologie verwendet, hauptsächlich für Elektrophorese von Nukleinsäuren. Tris-Puffer werden unter leicht basischen pH-Bedingungen wie bei der DNA-Elektrophorese verwendet, da dies die DNA hält löslich in der Lösung und deprotoniert, so dass es von der positiven Elektrode angezogen wird und durch a wandert Gel. EDTA ist ein Bestandteil in der Lösung, weil dies häufig Chelatbildner schützt Nukleinsäuren vor dem Abbau durch Enzyme. Das EDTA chelatiert zweiwertige Kationen, die Cofaktoren für Nukleasen sind, die die Probe kontaminieren können. Da das Magnesiumkation jedoch ein Cofaktor für DNA-Polymerase und Restriktionsenzyme ist, wird die EDTA-Konzentration absichtlich niedrig gehalten (etwa 1 mM Konzentration).
Sie müssen die Lösung nicht sterilisieren. Obwohl nach einiger Zeit eine Ausfällung auftreten kann, ist die Stammlösung immer noch verwendbar. Sie können den pH-Wert mit einem pH-Meter einstellen und tropfenweise zugeben Salzsäure (HCl)
. Es ist in Ordnung, TBE-Puffer bei Raumtemperatur zu lagern, obwohl Sie die Stammlösung möglicherweise durch einen 0,22-Mikron-Filter filtern möchten, um Partikel zu entfernen, die die Ausfällung fördern würden.Die versehentliche Verwendung einer 5X- oder 10X-Stammlösung führt zu schlechten Ergebnissen, da so viel Wärme erzeugt wird. Zusätzlich zur schlechten Auflösung kann die Probe beschädigt werden.
Obwohl TBE und TAE übliche Elektrophoresepuffer sind, gibt es solche andere Optionen für leitfähige Lösungen mit niedriger Molarität, einschließlich Lithiumboratpuffer und Natriumboratpuffer. Das Problem bei TBE und TAE besteht darin, dass Puffer auf Tris-Basis das elektrische Feld begrenzen, das bei der Elektrophorese verwendet werden kann, da zu viel Ladung eine außer Kontrolle geratene Temperatur verursacht.